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如何正確使用細胞凍存液進(jìn)行細胞凍存?

更新時(shí)間:2024-01-15   點(diǎn)擊次數:989次
  細胞凍存是將細胞置于低溫下保存的過(guò)程,以延長(cháng)其存活時(shí)間和保持其功能活性。正確使用進(jìn)行細胞凍存是確保細胞存活和質(zhì)量的關(guān)鍵步驟。下面是一些正確使用細胞凍存液進(jìn)行細胞凍存的步驟:
 
  1、準備細胞:首先,需要選擇適合冷凍保存的細胞類(lèi)型,并確保其生長(cháng)狀態(tài)良好。通常,最好在細胞達到對數生長(cháng)期時(shí)進(jìn)行凍存。
 
  2、洗滌細胞:將培養基從培養瓶或培養皿中倒掉,用無(wú)菌PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)洗滌細胞兩次,以去除殘留的培養基和血清。
 
  3、收集細胞:使用合適的方法收集細胞,例如通過(guò)離心使細胞沉淀,然后用無(wú)菌移液管輕輕吸出細胞。
 
  4、懸浮細胞:將收集到的細胞懸液轉移到含有適當體積的細胞凍存液中。通常,它的濃度為10%DMSO(二甲亞砜)+90%基礎培養基??梢愿鶕煌毎?lèi)型和實(shí)驗室的要求進(jìn)行調整。
 

細胞凍存液

 

  5、混合細胞:將細胞懸液與其充分混合,確保每個(gè)細胞都被均勻涂覆??梢允褂眯D器或手動(dòng)輕輕搖動(dòng)來(lái)混合。
 
  6、分裝細胞:根據需要,將混合好的細胞懸液分裝到凍存管中。每個(gè)凍存管中的體積應根據細胞類(lèi)型和預期的復蘇次數來(lái)確定。通常,每個(gè)凍存管中的體積不應超過(guò)總體積的10%。
 
  7、標記和記錄:在每個(gè)凍存管上標記細胞的名稱(chēng)、日期和凍存編號等信息。同時(shí),還應記錄有關(guān)細胞的信息,如來(lái)源、種類(lèi)和傳代次數等。
 
  8、冷凍細胞:將分裝好的凍存管放入冷凍器中,逐漸降低溫度至-80°C或更低的溫度。降溫速率應控制在1°C/分鐘以下,以避免冰晶的形成對細胞造成損傷。
 
  9、儲存細胞:將冷凍的細胞存放在-80°C或更低的溫度下的冷凍器中。確保冷凍器的溫度穩定且無(wú)振動(dòng)或其他干擾因素。
 
  總之,正確使用細胞凍存液進(jìn)行細胞凍存需要注意選擇合適的細胞類(lèi)型、控制降溫速率、避免污染和振動(dòng)等因素,以確保細胞的存活和質(zhì)量。

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